各省、自治區、直轄市農業農村（農牧）、畜牧獸醫廳（委、局），新疆生產建設兵團農業農村局、黑龍江省農墾總局，各有關單位:
為貫徹落實《鄉村振興戰略規劃（2018-2022年）》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規劃》，切實加強我國地方豬遺傳資源保護，有效應對非洲豬瘟疫情的嚴重威脅，農業農村部種業管理司決定開展國家級地方豬遺傳材料采集保存工作。現將《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》印發你們，請按照方案要求，認真抓好相關任務措施落實。如有不可抗力等有關情況，及時向我司畜禽種業處、全國畜牧總站反饋。
聯系人及電話：
種業管理司畜禽種業處 周曉鵬 010—59193287
全國畜牧總站畜禽資源處 張桂香 010—59194625
農業農村部種業管理司
2019年6月17日
國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案
為貫徹落實《鄉村振興戰略規劃（2018-2022年）》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規劃》，有效應對非洲豬瘟疫情對地方豬遺傳資源的嚴重威脅，加快國家級地方豬品種遺傳材料采集和保存，提高地方豬遺傳資源保護能力，維護地方豬遺傳資源的系統性和完整性，制定本方案。
一、目的意義
我國地方豬遺傳資源具有抗逆性強、耐粗飼、繁殖率高、肉質優良等特性，利用地方豬遺傳材料開展育種工作，有利于提高生豬種業競爭力，發展特色畜牧業，滿足城鄉居民多樣化、高品質消費需求。當前非洲豬瘟防控形勢復雜嚴峻，對地方豬遺傳資源安全造成重大威脅。采用超低溫冷凍技術，采集保存我國地方豬品種的DNA、精液、體細胞及腸道菌群等遺傳材料，是應對非洲豬瘟疫情威脅，豐富地方豬品種保護手段，完善家畜遺傳資源保種體系，推動生豬種業健康可持續發展的重要途徑。
二、主要任務
?。ㄒ唬┎杉谱鬟z傳材料
采集制作61個國家級保種場、保護區內國家級地方豬精液、體細胞等遺傳材料（見附件1）。每個地方豬品種收集不少于120份耳組織樣（>2克/份）；每個品種制作冷凍精液不少于15000劑（0.25mL細管）或者7500劑（0.5mL細管）；每個品種制作體細胞系不少于222份（每份1mL）：每個品種收集不少于120份健康后備豬新鮮糞便樣品。
（二）構建國家級地方豬遺傳材料信息數據庫
在采集遺傳材料的同時，收集供體出生日期、三代以內系譜信息、性能測定等表型記錄數據，構建國家級地方豬遺傳材料信息數據庫。
三、任務分工
（一）全國畜牧總站。具體組織項目實施，制定遺傳材料采集制作和驗收標準，在江西農業大學、云南農業大學等單位協助下開展技術培訓，進行督導檢查與驗收，集中保存遺傳材料，收集匯總記錄檔案。指導中國農業大學構建采集遺傳材料信息數據庫，做好數據庫運行和維護等工作。
（二）保種場（保護區）。協助開展遺傳材料采集和制作，以及病毒、細菌檢測等工作，協助提供供體三代以內系譜（需簽字蓋章）、生產性能測定等數據以及正面、側面數碼照片各1張。
（三）遺傳材料制作單位。江西農業大學、云南農業大學等遺傳材料采集制作單位，與全國畜牧總站簽訂安全和保密承諾書，采集制作遺傳材料并開展病毒、細菌等檢測（見附件2、3），提供檢測報告或者相關證明材料，填報相關數據（見附件4、5、6、7），按期將制作產品運送至國家級家畜基因庫保存。
江西農業大學豬遺傳改良與養殖技術國家重點實驗室和云南農業大學協助全國畜牧總站制定遺傳材料采集技術規范，進行技術指導，備份采集的遺傳材料，定期向全國畜牧總站書面匯報工作進展。
四、進度安排
1月至6月中旬：制定實施方案，明確參與遺傳材料采集單位的任務，與有關單位簽訂購買服務合同。
6月下旬：舉辦國家級地方豬遺傳材料采集制作培訓班，全面啟動相關工作。
6月下旬至12月：開展遺傳材料采集制作及入庫保存工作。對各制作單位收集制作遺傳材料進行質量抽查。
12月底：各遺傳材料制作單位提交項目執行情況等總結報告。
五、保障措施
?。ㄒ唬┘訌娊M織領導。農業農村部種業管理司負責總體統籌協調，省級農業農村主管部門積極協調配合本轄區內工作。全國畜牧總站牽頭組織實施，省級畜牧技術推廣機構、遺傳材料制作單位以及國家級地方豬保種場（保護區）、地縣農業農村部門、各級種業管理系統等通力協作、密切配合，確保高效完成工作。
?。ǘ┮幏堕_展工作。加強對制作單位和保種場（保護區）的培訓指導，強化項目參與人員、遺傳材料、數據信息等管理，保證遺傳材料質量與生物安全。明確所收集遺傳材料的所有權、使用權等，相關專項成果等按照國家法律法規及相關規定實現共享。
（三）嚴格經費使用管理。承擔單位應加強項目經費管理，建立健全內審機制，?？顚Ｓ茫鞔_經費預算、使用范圍，嚴格按照預算支出。項目組織實施單位會同地方主管部門，定期不定期對項目單位的資金使用情況、執行進度等進行督導，保障項目規范有序實施。
附件：1.任務分工表
2.國家級地方豬遺傳材料制作及質量檢測方案
3.疫病檢測清單
4.遺傳材料采集供體登記表
5.精液采集和制作記錄表
6.體細胞制作記錄表
7.國家級家畜基因庫樣品采集記錄表 附件1
備注：1.具體任務可根據工作需要進行適當調整。 2.*表示該品種包括兩個或者兩個以上保護場（區）。 附件2 國家級地方豬遺傳材料制作及質量檢測方案 一、精液冷凍保存 （一）數量要求 每個保種場（保護區）的每個品種保存冷凍精液不少于15000劑（0.25mL細管）或7500劑（0.5mL細管），公豬不少于6頭，涵蓋所有家系，每個個體保存冷凍精液不少于800劑（0.25mL）或400劑（0.5mL）。 ?。ǘ┕w要求 符合品種特性、特征；三代以內無血緣關系，系譜清楚；健康、必檢疾病為陰性。 ?。ㄈ┘毠軜擞浖鞍b 應在細管上標明保種場（保護區）建設單位代碼、品種代碼、供體號和生產日期。保種場（保護區）建設單位代碼用漢語拼音大寫首字母表示，品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母，生產日期按年月日次序排列，年月日各占二位數字，年度的后兩位數組成年的二位數，月、日不夠二位的，月、日前分別加“0”補充為二位數。 細管標記示例：
棉塞封口端 封口端 CQXK為重慶畜牧科學院代碼，RCZ為榮昌豬的品種代碼，11003為該公豬號，120525為2012年5月25日的生產日期。 細管裝入指形管，指形管上標記供體豬號、冷凍精液數量及生產日期。再用滅菌紗布袋將裝有冷凍精液的指形管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝一頭豬的冷凍精液，并有標簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標簽要求標記如下內容：袋號、品種、供體豬號、冷凍精液數量、解凍后精子的活力。 ?。ㄋ模┵|量檢測 1. 抽樣數量及要求 抽取總樣本量的2%進行質量檢測，檢測合格率要求達到80%以上。 2. 指標 ?。?）0.25mL劑型冷凍精液 每支劑量≥0.18mL；活力≥30%；精子畸形率≤20%；每支前進運動精子數≥2.5×107；每支細菌菌落數≤800個。 （2）0.5mL劑型冷凍精液 每支劑量≥0.40mL；活力≥30%；精子畸形率≤20%；每支前進運動精子數≥5.0×107；每支細菌菌落數≤1600個。 二、體細胞冷凍保存 ?。ㄒ唬盗恳?/p> 每個保種場（保護區）的每個品種公豬不少于12頭，涵蓋所有家系；母豬不少于25頭，每個個體體外培養原代或第1代細胞6管，每管1mL，用1.5mL或2.0mL凍存管包裝，細胞密度為1×105/mL以上。 ?。ǘ┕w要求 符合品種特性、特征；三代以內無血緣關系，系譜清楚；健康、必檢疾病為陰性。 ?。ㄈ├鋬龉軜擞浖鞍b 凍存管上標記編號、品種漢語名稱或代碼，細胞名稱或代碼、性別、培養代數、凍存日期。用滅菌紗布袋將凍存管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝2-3頭豬的凍存管，并有標簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標簽標記品種、供體豬號、凍存管數量。 ?。ㄋ模┵|量檢測 1.抽樣數量。抽取總樣本量的4%進行質量檢測，檢測合格率要求達到70%以上。 2.指標。細胞密度不低于1×105個/mL；細胞活力80%以上；支原體檢測為陰性。 三、耳組織及基因組DNA樣冷凍保存 每個保種場（保護區）每個品種采樣數量40頭（對所有公豬家系全部進行采樣，繁殖公豬、繁殖母豬各1頭，以及后備公豬和后備母豬各1頭，且后備豬避免全同胞關系）。每個品種每個個體采集3份耳樣，每份耳組織樣不少于2克（用2 ml凍存管保存），凍存管上詳細標注品種、耳號、性別、采樣日期、場地等關鍵信息。耳樣采集后立即置于液氮中保存。 四、腸道菌群冷凍保存 ?。ㄒ唬盗恳?/p> 每個保種場（保護區）每個品種公豬不少于10頭，母豬不少于50頭，每頭豬采集糞便樣本2份（每份2克）。 ?。ǘ┕w要求 60日齡后備豬，符合品種特性、特征；三代以內無血緣關系，系譜清楚；近一個月沒有使用抗生素、食欲正常、體重達該品種60日齡階段標準。 （三）凍存管標記及包裝 凍存管上標記編號、品種漢語名稱、性別、采樣日齡、采樣日期。 ?。ㄋ模┎蓸右蠛头椒?/p> 1．采樣要求 （1）每頭豬采集新鮮糞便樣本2份（每份2克），其中一份用2.0 mL凍存管包裝后立即投入液氮或-80℃保存，另一份用5.0mL凍存管取1克新鮮糞便置于3.0 mL 含20%甘油和5%蔗糖的保護液中，液氮或-80℃保存。 （2）采樣用凍存管要求無菌，配置的含20%甘油和5%蔗糖的保護液無菌。 （3）從肛門采集新鮮糞便樣品，采樣時每頭豬要更換新的手套，防止交叉污染。 2.糞便樣品采集和保存方法 （1）采樣前準備。①2 mL和5 mL凍存管高壓滅菌（或直接購買無菌凍存管）；②配置75%乙醇；③冷凍保護液配置：以配置100mL保護液為例：無菌生理鹽水中加入20 mL甘油和5g蔗糖，混勻、定容到100 mL。④液氮或干冰；⑤其它耗材：一次性手套、紙巾等。 （2）樣品采集。①固定采樣豬，用紙巾和75%乙醇擦洗肛門；②換上一次性手套，從肛門采集糞便樣品；③從采集的糞便團塊中，取中間部分糞便2克裝入2 mL凍存管，擦拭干凈凍存管，在管壁標記耳號、性別、采樣如期和年齡，立即投入液氮中；④另取中間部分糞便1克裝入放有3 mL保護液的凍存管中，混勻，在管壁標記耳號、性別、采樣如期和年齡，投入液氮中。⑤在液氮中保存，或送至實驗室后轉移到-80℃。⑥樣品運輸郵寄可用干冰。 附件3 疫病檢測清單
備注：1-5為必檢測項目，6-17為選測項目。 附件4 遺傳材料采集供體登記表 保種場（區）： 時間： 年 月— 年 月 共 頁 第 頁
有系譜者不用填寫，來源：填寫省（市）、縣、鄉、村；親緣關系：填寫與收集了遺傳物質的其他個體的親緣關系，如和“XXX”“父子”或“同父”“同母”...有親緣關系但不清楚的填寫“有”，沒有親緣關系填寫“無”，親緣關系不清楚填寫“不清楚”。 全國畜牧總站國家家畜基因庫制 附件5 保種場（區）名稱： 品種： 共 頁 第 頁
全國畜牧總站國家家畜基因庫制 附件6 體細胞制作記錄表 保種場（區）名稱： 品種： 共 頁 第 頁
全國畜牧總站國家家畜基因庫制 附件7 國家家畜基因庫
樣品采集記錄表 品種名稱： 保種場（區）： 采樣量： 采樣人員： 采樣時間：
注：1. 采樣編號：品種代碼（三位）和順序號（二位），其中品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母，順序號不足位數用“0”補齊。 2. 類別：指能繁母豬、種公豬、后備公豬或后備母豬。 3. 樣品類型：指耳組織或血液。  附件：農種畜函〔2019〕14號-農業農村部種業管理司關于印發《國家級地方豬品種遺傳材料采集保存工作實施方案》.pdf |
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